Chlorofyl je zelené barvivo, které se nachází ve vyšších rostlinách a všech ostatních fotosyntetických organismech. Chlorofyl A a chlorofyl B jsou rozpustné v ethanolu, etheru a acetonu a dalších rozpouštědlech, nerozpustné ve vodě a petroletheru, proto mohou k extrakci chlorofylu používat polární rozpouštědla, jako je aceton, methanol, ethanol, ethylacetát a podobně.
Proces extrakce chlorofylu:
Extrakce chlorofylu se připravuje v polotmavé místnosti při 25 °C. Kroky extrakce jsou následující:
(1) Vezměte 1000 gramů čerstvých zelených listů a rozdrťte je ve Wechsleru.
(2) Rozdrcených 1000 gramů zelených listů vložte do acetonu s malým množstvím uhličitanu vápenatého (teplota 20 stupňů) k extrakci, dokud nejsou úlomky listů po filtraci a čištění bezbarvé.
(3) Přefiltrovaný acetonový extrakt vložte do nálevky obsahující 1 litr petroletheru a 100 ml acetonu a poté jemně otáčejte, přičemž přidávejte destilovanou vodu, dokud se stratifikuje. Většina acetonu a ve vodě rozpustných nečistot ve vodní vrstvě se vyhodí a zůstane pouze roztok petroletheru.
(4) Poté, co se petroletherový roztok znovu přečistí destilovanou vodou, více než 5x se vyčistí 200 ml 80% methanolového roztoku obsahujícího petrolether a 0,01 g kyseliny šťavelové a nakonec se získá žlutozelená suspenze .
(5) Suspenzi vysušte bezvodým síranem sodným a infiltrujte ji do sloupce vyrobeného z prášku sacharózy o tloušťce 3 cm. Poté vyčistěte vysrážené pigmenty, abyste odstranili karotenoidy a aby obsahovaly pouze přírodní chlorofyl.
(6) Sacharózový sloupec obsahující přírodní chlorofyl je rozdělen do dvou vrstev, zelená vrstva má vrstvu chlorofylu B 4-10 mm, druhá modrá vrstva je vrstva 2-6 mm chlorofylu A.
(7) Část umístěná uprostřed modré vrstvy (asi polovina modré vrstvy) se vloží do etheru, suspenze se zfiltruje a extrahuje, vyčistí destilovanou vodou, vysuší síranem sodným a zfiltruje za použití náčiní, aby se získal chlorofyl. A.
(8) Odstraňte střední část zelené vrstvy v (6) a rychle ji vložte do etheru pro filtraci a promytí, aby se vytvořil roztok chlorofylu B v etheru.
Jak oddělit při extrakci?
Chromatografie je důležitou metodou pro separaci, čištění a identifikaci organických sloučenin, zejména v mikroanalýze je široce používána. Mezi pigmenty v ovoci a zelenině patří především karoten rozpustný v tucích, lutein, chlorofyl a ve vodě rozpustný antokyan. V extrakčních experimentech můžeme využít princip podobné mísitelnosti ve vodě rozpustné antokyanové filtrace, která zase může využít tenkovrstvou chromatografii, sloupcovou chromatografii, vysokoúčinnou kapalinovou chromatografii (HPLC) až po separaci beta-karotenu, luteinu a chlorofyl, oslabený v důsledku polarity tří typů pigmentu, lze vhodně zvolit jediné organické rozpouštědlo nebo jiný poměr směsného rozpouštědla jako expanzního činidla a elučního činidla. Byly stanoveny optimální separační podmínky.
